測任何目標(biāo)蛋白的抗體不止一種，同一家抗體公司可能有好幾種，甚至幾十種。在不同的抗體公司，則更多。那么在眼花繚亂的抗體陣中，如何選擇自己實(shí)驗(yàn)需要的抗體呢?選擇適合實(shí)驗(yàn)的抗體需要綜合考慮多個因素，包括實(shí)驗(yàn)類型、樣本種屬、抗體的特異性、宿主物種來源以及是否需要熒光標(biāo)記等。
以下是選擇抗體時應(yīng)遵循的基本步驟和注意事項(xiàng)：
1. 確定實(shí)驗(yàn)類型：不同的實(shí)驗(yàn)技術(shù)如Western Blot (WB)、免疫組化(IHC)、免疫熒光(IF)、流式細(xì)胞術(shù)(FC)等對抗體有不同的要求。例如，WB實(shí)驗(yàn)最好選擇特異性高、能識別線性表位的抗體，而IF和IHC可能需要能識別天然結(jié)構(gòu)的抗體。
2. 確認(rèn)目標(biāo)蛋白：了解你要檢測的蛋白的名稱、亞型、修飾狀態(tài)（如磷酸化、乙?；龋ふ夷芴禺愋宰R別該蛋白的抗體。
3. 選擇合適的種屬：抗體的反應(yīng)種屬應(yīng)與你的實(shí)驗(yàn)樣本匹配。如果樣本是人源的，應(yīng)選擇反應(yīng)種屬包含人的抗體。不同種屬的抗體可能會對同源蛋白有交叉反應(yīng)，但通常會注明可反應(yīng)的種屬范圍。
4. 抗體類型：單克隆抗體(mAb)特異性高，但親和力可能不如多克隆抗體(pAb)，后者通常具有更好的親和力和敏感度。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的抗體類型。
5. 宿主物種來源：在選擇一抗時，注意宿主物種來源，因?yàn)檫@會影響二抗的選擇。例如，如果一抗是小鼠來源的，二抗應(yīng)選擇抗小鼠的，以避免內(nèi)源性免疫球蛋白的干擾。
6. 熒光和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記：對于需要熒光檢測的實(shí)驗(yàn)（如IF、FC），選擇帶有合適熒光標(biāo)記的抗體。確保所選熒光染料與你的檢測儀器兼容，并注意熒光之間的重疊，以減少補(bǔ)償問題。
7. 驗(yàn)證信息：選擇經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的抗體，最好選擇有大量文獻(xiàn)引用的抗體，這通常意味著該抗體的性能得到了廣泛認(rèn)可。
8. 同型對照抗體：在流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)中，使用同型對照抗體可以排除非特異性結(jié)合的背景信號。
9. 抗體稀釋和孵育條件：根據(jù)說明書調(diào)整抗體的稀釋比例和孵育時間，以優(yōu)化信號和減少背景。
10. 供應(yīng)商和質(zhì)量：選擇信譽(yù)良好的供應(yīng)商，確?？贵w的質(zhì)量和穩(wěn)定性。有時，免費(fèi)的抗體樣品測試可以幫助你確認(rèn)抗體是否適合你的實(shí)驗(yàn)。
通過上述步驟，你可以選擇到最適合你實(shí)驗(yàn)需求的抗體，從而提高實(shí)驗(yàn)的成功率和結(jié)果的可靠性。
