閾值循環(huán)數(shù) Threshold cycle (Ct) 也寫作Cq值,熒光信號(hào)大于熒光閾值時(shí)PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個(gè)循環(huán)的熒光值設(shè)為基線(baseline),是由于測(cè)量的偶然誤差引起的。閾值(threshold)一般是基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。在實(shí)際操作中也可以手動(dòng)調(diào)節(jié)。高于閾值的熒光信號(hào)被認(rèn)為是真實(shí)的信號(hào),用于定義Ct值。Ct會(huì)受到閾值的影響,每次試驗(yàn)由于樣品和儀器的不同會(huì)導(dǎo)致基線不同,進(jìn)而影響閾值和Ct值。
血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體,是血漿去除纖維蛋白后的混合物,主要成分包括蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、維生素和多肽(如生長(zhǎng)因子、胰島 素、促生長(zhǎng)激素)等。血清是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),同時(shí)也對(duì)細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體,通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)在生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中,ELISA是一種非常常見(jiàn)的分析方法。其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。該實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高,特異性較好,操作較簡(jiǎn)單,可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。而在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中,有時(shí)會(huì)遇到一種被稱為“花板”的現(xiàn)象。
“花板”現(xiàn)象,顧名思義,是指在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí),酶標(biāo)板上的反應(yīng)孔出現(xiàn)了不均勻的顏色分布,使得孔內(nèi)的顏色看起來(lái)像是“花”一樣。所謂“花板”,就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高,弱陽(yáng)性結(jié)果較多。這一現(xiàn)象的出現(xiàn),影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,往往是由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的某些操作不當(dāng)或試劑的問(wèn)題所導(dǎo)致的。對(duì)“花板”現(xiàn)象進(jìn)行了分析和總結(jié),認(rèn)為花板原因大多在樣品,解決辦法主要在洗滌,孵育和顯色過(guò)程也會(huì)導(dǎo)致。
免疫熒光試驗(yàn)(immunofluorescence test)一種免疫標(biāo)記技術(shù)。用于檢測(cè)相應(yīng)抗原或抗體。即用熒光素與抗體連接成熒光抗體,再與待檢標(biāo)本中的抗原反應(yīng),置熒光顯微鏡下觀察,抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光,借此對(duì)標(biāo)本中的抗原進(jìn)行鑒定或定位。
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